6个DRG，30分钟：单细胞悬液制备仪在小鼠背根神经组织解离中的应用

一、实验背景

在单细胞测序（scRNA-seq）、流式分选及类器官培养等研究中，单细胞悬液的质量直接决定下游数据的可靠性。背根神经节（DRG）是感觉神经系统的中转站，也是研究疼痛机制、神经损伤修复及感觉神经元异质性的关键样本。然而，DRG组织解离难度较高：细胞外基质致密，消化液难以均匀渗透；神经元胞体脆弱、轴突细长，机械剪切稍重即造成损伤；细胞间黏附紧密，手工剪碎结合吹打易出现解离不充分或过度解离。传统手工解离存在耗时长、批次间波动大、活率与得率不稳定等问题，同一方案在不同操作者之间结果差异明显。

二、实验方案

2.1 实验目的

将小鼠背部DRG制备成单细胞悬液，用于下游单细胞测序或流式分析。

2.2 样本与设备

2.3 操作流程

① 预热：连接仪器电源，打开开关，启动预热，选择对应程序备用。

② 解冻试剂：消化酶和终止液提前用流动自来水解冻，使其混合均匀。

③ 取材：小鼠断颈处死后，取出DRG神经节，放入装有PBS的培养皿中，置于冰上。

④ 剪碎与第一轮消化：将6个DRG组织用PBS洗涤后，用眼科剪剪去尾部，放入消化管，加入消化酶。

⑤ 自动运行：启动程序，仪器自动运行，时间结束后自动停止，减少人为操作引入的误差。

⑥ 终止与重悬：加入终止液终止消化（消化液:终止液=1:1），过滤，离心，弃上清，重悬细胞，即得单细胞悬液。

三、实验结果

解离完成后，取适量细胞悬液于显微镜下观察：细胞分散度良好，背景较为干净，未见明显的大块组织残留，符合下游单细胞测序、流式分析的样本要求。

四、仪器核心能力

1. 酶解与磁珠剪切协同解离

高密度剪切磁珠在恒温条件下持续、温和地扰动组织，配合消化酶降解细胞外基质与黏附分子，在充分解离的同时减少细胞损伤。

2. 全自动、参数可编程

程序一键设定，将依赖手感的操作转化为可复现的流程，显著降低批次间差异。

3. 精准控温

恒温消化，避免温度波动造成的细胞活性流失，对神经、免疫等脆弱样本尤为适用。

4. 密闭消化管与标准化耗材

降低污染与气溶胶风险，也使不同操作者之间的结果更趋一致。

五、总结

单细胞研究的质量竞争正从测序深度转向样本质量。单细胞悬液制备仪通过酶解与磁珠剪切协同、全自动程序控制、精准控温和密闭消化管设计，将小鼠背根神经节的解离流程标准化，在30分钟内完成6个DRG的单细胞悬液制备。所得悬液细胞分散度良好，满足下游单细胞测序及流式分析要求。该设备为神经组织等难解离样本的前处理提供了一种可重复、标准化的技术方案。