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26 人阅读发布时间:2026-08-26 13:50
在二代测序(NGS)文库构建流程中,DNA片段化是第一步,也是决定数据质量的起点。
片段太长,文库构建效率低、簇生成不均;片段太短,配对读长失效、基因组结构信息丢失;分布太散,文库复杂度下降、重复读段占比升高。
对Illumina、BGI等主流NGS平台而言,插入片段300–500 bp、分布窄、峰型对称,是理想的片段区间。
传统方法各有局限:酶切法耗时长且有序列偏好性;探头式超声易造成样品雾化与交叉污染;部分机械法均一性差、片段分布拖尾严重。
一组梯度打断实验的数据,可以直观看到这台仪器的表现。
一、5 / 10 / 15 / 20 min打断效果
同一样本分别打断5、10、15、20分钟,采用毛细管电泳检测片段分布,结果如下:
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打断时间 |
主峰位置 |
片段分布特征 |
与NGS文库的契合度 |
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5 min |
~389 bp |
分布集中、峰型对称 |
命中Illumina/BGI等平台300–500 bp插入区间 |
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10 min |
~267 bp |
偏向短片段、峰型对称 |
适合短读长测序、ATAC-seq前处理 |
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15 min |
~208 bp |
主峰进一步前移 |
适合小片段文库(如miRNA-seq前处理) |
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20 min |
~230 bp |
短片段区间、峰型稍宽 |
适合小片段文库(如miRNA-seq前处理) |
5分钟打断,片段主峰落在389 bp附近,正好命中Illumina、BGI等主流NGS平台推荐的最佳插入区间。
二、仪器特点
非接触式打断,零交叉污染:样品全程封闭在离心管内,声波经水介质传导,避免探头接触导致的样本间污染和雾化损失。
高通量并行,效率倍增:单批次可同时处理30个样品,升级后双通道可处理60个样品。
片段精准可控:通过梯度实验可锁定目标区间,5分钟即可命中300–500 bp黄金区间。
批次间高重复性:仪器内置旋转电机,样品在超声过程中持续旋转,能量分布更均匀。
低温保护:冷水机水浴循环维持低温环境,降低DNA热降解风险,配备高温报警装置。
耗材开放:兼容常规离心管,无专用耗材绑定。
低样本起始量:最低1 ng DNA即可打断,适用于cfDNA、FFPE DNA等低浓度珍贵样本。
一机多用:覆盖gDNA打断、cfDNA/ctDNA处理、FFPE DNA、ChIP染色质剪切、细菌/酵母/细胞裂解等场景。
三、其他案例
人全血DNA打断实验:目标片段150–300 bp,打断产物集中在180–200 bp区间,符合目的片段要求。
昆虫DNA ChIP实验染色质打断前处理:随着超声时间延长,片段逐渐变短,可通过调整时间获得目标片段。
四、总结
一组打断时间的数据,背后是文库构建效率的提升、流程步骤的简化、珍贵样本的低损耗。如果你正在为NGS的片段化环节寻找更稳、更快、更兼容的方案,这台仪器值得考虑。