致密肿瘤组织解离的标准化路径：小鼠前列腺肿瘤单细胞制备实操分享

单细胞测序、流式细胞术以及肿瘤免疫研究，实验的起点往往是一管高质量的单细胞悬液。但做过实体肿瘤组织的人都清楚——组织越致密，解离越容易翻车。

前列腺肿瘤恰恰属于这种“难缠”的类型：纤维含量高、组织致密、机械强度大。前处理阶段解离不理想，细胞得率低、碎片多、活率下滑，后续实验还没开始就已经被拖慢了节奏。针对这类致密组织，我们在实验过程中采用了上海净信JX-DLDXB-4单细胞悬液制备仪完成组织解离，并对整个操作流程进行了记录和复盘，希望能为同类型实验提供参考。

 

一、实验准备

本次实验样本来源于小鼠前列腺肿瘤组织。由于组织较为致密，在正式解离之前，需要先将样品剪切成约2~3 mm的小块，以增加消化酶与组织接触面积，提高后续解离效率。

实验采用配套单细胞悬液制备试剂盒，包括组织消化酶和缓冲液。试剂需全程按照要求低温保存，使用前提前完成解冻，避免反复冻融造成酶活性下降。仪器方面，使用净信JX-DLDXB-4单细胞悬液制备仪。设备采用四通道设计，可同时处理多个样本，并内置针对不同组织类型优化的预设程序，减少人工调参工作量。

 

二、实验操作流程

1. 组织剪切与加酶

待小鼠前列腺肿瘤组织完成剪切后，将组织块转移至消化管，加入配制好的消化液。组织剪切环节不能省略——如果组织块过大，消化酶难以充分渗透，即使机械解离能力较强，也可能残留较多未解离组织，最终堵塞滤网，降低细胞得率。

2. 上机解离

将消化管安装至设备对应通道，在程序界面直接调用对应的程序参数启动运行。程序启动后，设备自动升温，进行恒温酶解，同时结合机械振荡促进组织逐步分散。相比人工不断吹打、摇晃，整个过程更加稳定，减少了人为因素带来的实验波动。

3. 过滤与清洗

程序结束后，将消化液轻轻吹打，使附着于管壁的细胞充分释放，再依次通过细胞滤网进行过滤，去除未完全解离的组织碎片和细胞团块。过滤后的细胞悬液进入离心步骤。注意控制离心条件，避免过度离心造成细胞损失。

4. 重悬与计数

完成清洗后，使用PBS或培养基进行重悬，通过血球计数板或自动细胞计数仪检测细胞浓度及活率。本次实验制备的小鼠前列腺肿瘤组织悬液细胞活率可达97.93%，满足后续流式细胞分选实验的应用要求。

三、操作中容易忽略的细节

1. 组织剪切不能省

很多人认为自动化设备可以完全替代前处理，其实并非如此。适当剪切组织块是保证酶解效率的前提，不能因为使用了自动化设备就跳过这一步。

2. 试剂保存直接影响解离效果

组织消化酶对保存条件要求较高，反复冻融会导致酶活性下降。即使后续程序完全一致，也可能出现解离效率降低的问题，建议严格按照说明完成保存和解冻。

3. 不建议随意修改程序参数

JX-DLDXB-4针对不同组织类型建立了对应程序。以小鼠肿瘤程序为例，其内部已设定好温度、振荡频率及运行时间。自行调整参数反而可能导致组织解离不足或细胞损伤增加。

4. 自动化解离带来的变化

与此前采用人工研磨方式相比，本次实验最大的变化体现在样品一致性。自动化解离后的细胞悬液更加均匀，组织碎片明显减少，细胞得率更加稳定，重复实验之间的数据波动明显减小。

 

四、自动化单细胞悬液制备的应用价值

针对前列腺肿瘤等致密组织，自动化单细胞悬液制备不仅能够降低人为操作带来的差异，还能提高细胞悬液质量，为后续单细胞测序、流式分选、细胞培养及肿瘤免疫研究提供更稳定的样本来源。

从本次实验来看，规范的组织预处理、合理的程序选择以及适度的清洗步骤，是保证实验成功率的几个关键因素。自动化设备并不能替代实验细节，但能有效提高整个流程的标准化程度，减少不同实验人员之间的操作差异。

对于长期开展肿瘤组织单细胞研究的实验室而言，将组织解离流程标准化，有助于提升实验数据的一致性，也能降低重复实验带来的时间和样本成本。这也是自动化单细胞悬液制备设备在科研实验室应用不断增加的重要原因。

对于需要开展多批次样品处理的实验来说，实验重复性往往比单次处理速度更重要。净信JX-DLDXB-4的四通道设计使多个样本能够同步处理，对于同时开展多个动物模型实验的实验室，也能够减少等待时间，提高整体实验效率。