小鼠卵巢单细胞悬液酶解制备流程：MJ022通用解离酶及配套试剂的应用

一、为什么卵巢单细胞制备如此棘手？

卵巢是生殖与内分泌研究的核心器官，其单细胞悬液制备面临组织致密、细胞类型复杂、活率难以保障等挑战。卵巢组织富含卵泡、颗粒细胞、卵母细胞、间质细胞、血管内皮细胞等多种细胞类型，组织致密、胶原纤维含量高，是单细胞制备领域公认的“硬骨头”。

1.传统摇床加消化酶方案面临的主要痛点：

2.消化不均匀，大块组织残留；

3.过度消化导致细胞活率下降。

 

二、酶离者产品矩阵——卵巢全流程覆盖

本次实验使用四款产品，覆盖消化→终止→裂红→去碎片全流程节点：

MJ022通用解离酶：通过多元复合酶的温和酶解作用，将各种组织高效解离成为单个细胞悬液，在高得率的同时获得高活性单细胞。

MJ102酶解终止液：用于终止组织或细胞酶解反应，快速中和酶活性，保护细胞完整性。

MJ103红细胞裂解液：高效裂解红细胞，配合FBS保护目标细胞。

MJ101高效去碎片剂：一步去除细胞碎片，提升悬液纯净度。

 

三、实验操作全流程

1. 仪器准备与程序设定

连接净信单细胞悬液制备仪电源，开机后选择卵巢对应程序，预设参数以备用。

2. 试剂解冻

将分装冻存的MJ022通用解离酶与MJ102酶解终止液提前取出，用流动凉水解冻，使各组分充分混合均匀。

注意：严禁使用温热水解冻，高温会破坏酶活性，影响消化效果。

3. 组织取材

小鼠断颈处死后，无菌操作取出双侧卵巢，置于含PBS的培养皿中，全程冰上操作，保持组织活性。

4. 组织剪碎与转移

PBS洗涤卵巢组织后，用眼科剪将组织剪成小块，转移至消化管中，加入约MJ022通用解离酶。

5. 上机消化

将消化管放入净信仪器模块，选择卵巢程序，点击运行。中途可暂停检查消化状态，消化完成后停止运行。

仪器+酶解双作用：仪器提供标准化程序化运动，确保每次消化均一稳定，避免人工摇床的批次差异。

6. 过滤与MJ102终止消化

用滤网过滤消化液，同步加入MJ102酶解终止液，精准终止酶活性，防止过度消化。

及时终止是保障活率的关键步骤，MJ102能够迅速中和消化酶，将细胞损伤降至最低。

7. 离心与MJ103红细胞裂解

过滤离心后弃上清，加入MJ103红细胞裂解液（含200 μl FBS），冰上裂红，高效去除红细胞干扰。

卵巢组织血供丰富，红细胞混入量大。MJ103裂解液能快速裂解红细胞，同时FBS的保护成分维护目标细胞完整性。

8. MJ101高效去碎片

加入PBS +MJ101高效去碎片剂，离心后弃上清。随后用PBS洗涤细胞，充分去除残留碎片与试剂。

卵巢组织消化后碎片量较多，MJ101一步去碎片可显著降低碎片比例，提升单细胞测序/流式分析的数据纯净度。

9. 重悬与质检

加入少量无菌PBS，轻柔吹打重悬底部细胞沉淀，即得单细胞悬液，镜检观察细胞形态。

 

四、实验结果

消化完成后，显微镜检测结果显示单细胞悬液质量优异，各项指标达到下游分析要求：

细胞分散均一：无明显团聚，细胞呈单个分散状态；

碎片率低：背景干净，杂质碎片显著减少；

红细胞裂彻底：镜下几乎无红细胞残留；

下游适用性：满足单细胞测序（scRNA-seq）及流式细胞术上样要求。

 

五、为什么选择酶离者全套方案？

消化环节：MJ022复合酶配方温和高效，适配卵巢致密组织；

终止环节：MJ102快速中和酶活性，精准控制消化终点；

裂红环节：MJ103配合FBS，兼顾裂红效率与细胞保护；

去碎片环节：MJ101一步去除碎片，提升悬液纯度。

四款试剂覆盖全流程，各环节协同作用，保证了卵巢单细胞悬液的高活性和高纯净度。