JX-CKSM系列单细胞悬液制备仪在小鼠肝脏原代细胞培养中的应用

一、实验背景

原代肝细胞培养是药物代谢、毒理学及肝脏再生研究中的常用模型。肝脏组织细胞间连接紧密、胞外基质丰富，单细胞悬液制备过程中需在细胞释放效率与活性保护之间取得平衡：剪切力过大易导致细胞膜破裂；消化不充分则细胞聚团率高，影响贴壁与后续实验。

本文以小鼠肝脏为样本，使用净信JX-CKSM系列单细胞悬液制备仪完成组织解离，并将制备的悬液进行原代贴壁培养，评估该设备在肝细胞制备中的实际效果。

 

二、实验方案

2.1 样本与试剂

项目	规格
实验动物	小鼠
目标组织	肝脏
设备	JX-CKSM系列单细胞悬液制备仪
试剂	配套解离酶、终止液
耗材	2mL消化管、70μm细胞筛网、PBS、培养基
检测方式	AOPI染色、细胞计数仪、倒置显微镜

2.2 操作流程

1.设备准备：仪器接通电源，开机预热，选择“肝脏”程序备用。

2.试剂解冻：解离酶与终止液提前用流动凉水解冻。

 

3.组织取材：小鼠断颈处死后取出肝脏，置于含PBS的培养皿中，全程冰上操作。

4.剪切与装样：将肝脏用PBS漂洗后剪碎，转入2mL专用消化管，加入约1mL消化酶，拧紧管盖后装入仪器模块。

 

5.程序运行：选定肝脏程序启动运行，仪器自动完成温和剪切、酶解协同与全程恒温控制，程序结束后自动停止。

6.过滤与终止：用70μm细胞筛网过滤消化液，按消化液：终止液=1：1比例终止酶活性。

7.离心与纯化：离心后弃上清，经裂红与碎片去除步骤获得纯化的肝实质细胞。

 

8.重悬与计数：加入少量无菌PBS重悬沉淀，AOPI染色后用细胞计数仪检测活率、聚团率及细胞直径。

 

9.贴壁培养：按常规肝细胞原代培养条件铺板，观察贴壁情况。

 

三、实验结果

细胞计数结果：

指标	检测值
细胞活率	92.07%
聚团率	2.33%
平均细胞直径	9.52μm

活率92.07%表明解离过程对细胞损伤较小，符合原代肝细胞培养的起始质量要求。聚团率2.33%反映悬液中单细胞比例较高，有利于后续流式分析及铺板均匀性。平均直径9.52μm与文献报道的小鼠肝细胞直径区间一致，说明细胞形态完整，未出现过度剪切导致的碎片化。

贴壁培养结果：

将制备的肝细胞悬液按常规条件铺板，24小时内可观察到大量细胞贴壁生长，背景干净，未见明显细胞碎片漂浮或大面积坏死灶。贴壁成功率与悬液质量直接相关——活率高、聚团率低的批次贴壁更快、贴壁率更高，本次实验的贴壁结果验证了制备环节的可靠性。

四、设备工作特点

JX-CKSM系列单细胞悬液制备仪在肝脏组织解离中的设计逻辑如下：

程序化控制：内置肝脏、肿瘤、心脏等多种器官程序，同一台仪器覆盖多组织应用，标准化操作流程可复用。

温和剪切：机械剪切与酶解协同作用，避免过度剪切导致的细胞破碎与活率损失。

全程恒温：运行过程中维持稳定温度，减少冷热应激对细胞的损伤。

模块化耗材：2mL、5mL消化管即插即用，操作简便，批次稳定性高。

自动化终点：程序到点自动停止，消除人工判断带来的随机误差。

五、实验操作注意事项

1. 组织剪切均匀性：上机前将肝脏剪碎至适宜大小，保证酶液与组织充分接触，是后续解离效果一致性的前提。

2. 全程低温操作：取材、剪切至离心重悬各环节均需在冰上或低温条件下完成，减少细胞应激。

3. 配平要求：消化管需对称配平放置于适配器中，避免运行过程中设备振动。

4. 试剂解冻方式：解离酶与终止液使用流动凉水解冻，避免高温影响酶活性。

六、适用场景

该设备可用于小鼠、大鼠、鲈鱼、香猪等多物种的肝脏及其他组织（肿瘤、心脏、皮肤等）单细胞悬液制备，制备的悬液适用于原代细胞培养、单细胞测序、流式细胞分析及类器官培养等下游实验。

七、总结

肝脏单细胞悬液制备是原代培养及单细胞测序实验的关键前处理步骤。JX-CKSM系列单细胞悬液制备仪通过程序化控制、温和剪切与酶解协同、全程恒温运行的工作机制，将组织解离流程标准化。小鼠肝脏样本的实测数据为活率92.07%、聚团率2.33%，悬液质量可支持后续贴壁培养。该设备可作为原代细胞培养、单细胞测序等实验的样本前处理工具。