净信单细胞悬液制备仪+酶离者试剂：小鼠子宫组织86.01%活率酶解方案

一、引言

在单细胞测序、流式细胞分析等实验中，高质量单细胞悬液的制备是决定实验结果可信度的首要步骤。子宫组织由平滑肌、内膜上皮细胞及丰富的血管网络构成，结构致密，细胞外基质丰富，细胞间连接紧密。传统制备方法如机械研磨或剪刀剪切，容易造成细胞膜破裂，导致活率偏低；而常规胰酶配方消化时间窗口窄，过度消化会使细胞大量死亡，消化不足则细胞团块残留，影响后续单细胞捕获效率。

为改善这一问题，本文采用酶离者MJ022通用组织消化酶，配合配套终止液、红细胞裂解液及去碎片试剂，在净信单细胞悬液制备仪上完成小鼠子宫组织的自动化酶解，建立了标准化操作流程，获得了高活性（86.01%）的单细胞悬液。

二、实验材料与试剂

• 实验动物：小鼠（颈椎脱臼处死）

• 消化酶：酶离者MJ022通用组织消化酶（干粉-20℃保存，溶解后分装冻存）

• 

• 终止液：MJ102终止液

• 红细胞裂解液：MJ103（含FBS）

• 去碎片试剂：MJ101

• 缓冲液：PBS（无菌）

• 仪器：净信单细胞悬液制备仪、自动细胞计数仪（AOPI双荧光染色）

• 

• 耗材：消化管、细胞滤网、眼科剪、培养皿等

三、实验步骤

3.1 仪器与试剂准备

• 连接单细胞悬液制备仪电源，打开开关，选择“子宫”对应程序备用。

• 将MJ022消化酶和MJ102终止液从冰箱取出回温（注意：切勿使用温热水加速解冻，以免酶活性提前下降）。

• 消化酶溶解后建议分装成小管，避免反复冻融。

3.2 组织取材

• 小鼠颈椎脱臼处死，迅速取出子宫，置于含PBS的培养皿中，冰上保存，减少细胞损伤。

3.3 剪碎与加酶

• 用PBS漂洗子宫组织，使用眼科剪充分剪碎至小块。

• 将剪碎的组织放入消化管中，加入MJ022通用消化酶。

3.4 程序化消化

• 将消化管置于单细胞悬液制备仪模块上，选择预存的“子宫”程序，点击运行。

• 运行过程中可暂停观察消化状态，当组织块基本分散、悬液呈浑浊状时判断消化充分，及时停止，避免过消化。

3.5 过滤与终止

• 使用滤网过滤消化液，去除未消化的组织块。

• 加入MJ102终止液，快速混匀以灭活酶活性。

3.6 离心、裂红与去碎片

• 离心，弃上清。

• 加入MJ103红细胞裂解液，冰上裂红。

• 加入PBS及MJ101去碎片试剂，再次离心弃上清。

• 用PBS洗涤细胞两次。

3.7 重悬与计数

• 加入适量无菌PBS，轻柔吹打管底沉淀，重悬细胞。

• 取少量悬液进行AOPI双荧光染色，用自动细胞计数仪检测细胞活率及浓度。

四、实验结果

经AOPI染色计数，本次制备的小鼠子宫单细胞悬液细胞活率达到86.01%。悬液中细胞形态完整，碎片较少，红细胞去除彻底，满足流式细胞术、单细胞测序等高要求下游实验的样本质量需求。

结果分析：MJ022消化酶的温和高效解离能力，结合MJ102终止液的快速精准灭活，避免了过度消化导致的细胞死亡；MJ103裂红液有效清除了红细胞干扰，MJ101去碎片试剂进一步提升了悬液纯度。全过程除仪器消化阶段为37℃外，其余步骤均保持低温操作，一定程度上保护了细胞活性。

五、注意事项与优化建议

1. 试剂保存：MJ022消化酶干粉可于4℃保存，溶解后必须分装并于-20℃冻存，避免反复冻融导致酶活性下降。

2. 裂红时间：MJ103裂红液冰上作用时间应严格控制在3–5分钟。时间过短裂红不彻底，过长则可能损伤目的细胞。

3. 洗涤强度：单细胞悬液洗涤次数不宜过多（建议2次），离心力不宜过大，以免造成细胞损失。

4. 全程低温：取材、剪碎、离心、重悬等步骤均应置于冰上或低温离心机中进行（消化步骤除外），以维持细胞高活性。

5. 消化终点判断：不同个体或品系的小鼠子宫组织致密程度可能有差异，建议首次实验时在中途暂停观察，根据组织块分散程度灵活调整消化时间。

六、总结

本文介绍了一种基于酶离者MJ022通用组织消化酶及配套试剂的小鼠子宫单细胞悬液制备方法。通过程序化仪器消化、精准终止、红细胞裂解及去碎片处理，成功获得了86.01%的高细胞活率。该方法操作标准化、重复性好，有效解决了子宫组织因结构致密而导致的单细胞悬液制备难题，适用于后续流式分析、单细胞测序等实验。该方案也为其他富含平滑肌或结缔组织的实体器官（如心脏、膀胱等）的单细胞悬液制备提供了参考思路。