干货 | 小鼠唾液腺单细胞悬液制备，从取材到质控全步骤详解

一、实验目的

将小鼠唾液腺组织制备成高质量单细胞悬液，为后续单细胞测序（scRNA-seq）、流式细胞分选及细胞功能研究等实验提供合格的细胞样本。

 

高效消化：专用程序5分钟完成，减少样本损失

高活性细胞：全程冰上操作，保护细胞活力

智能仪器：内置唾液腺专属程序，参数精确可控护细胞活力

质量可视化：AOPI染色+细胞计数仪即时验证结果

二、实验步骤

1.仪器准备：连接净信单细胞制备仪电源，打开开关，选择唾液腺专属程序备用。

2.试剂解冻：将消化酶提前配好（酶离者：干粉、溶解液全部混合），使试剂混合均匀，终止液用凉水解冻。

3.取材：小鼠断颈处死后，迅速取出唾液腺，置于盛有 PBS 的培养皿中，全程放在冰上保存

4.剪碎入管：将唾液腺组织用 PBS 洗涤后，用眼科剪剪碎，放入 2 ml 消化管中，加入约 1 ml 消化酶。

 

5.上机运行：将消化管放到仪器模块上，选择对应的唾液腺程序，点击运行开始消化。

6.消化完成：约 5 分钟后消化完成，停止运行，立即取出消化管。

7.过滤&终止：用 70 μm 滤网过滤细胞液，按 1:1 比例加入终止液终止消化，防止过度消化损伤细胞。

8.离心 & 去碎片：过滤后的悬液离心重悬，弃上清；加入 2 ml 裂红溶液（含 200 μl FBS），冰上裂红 3-5 min；再加入 500 μl PBS + 1 ml 碎片去除剂，离心弃上清，洗细胞两次，有效去除红细胞及细胞碎片。

9.重悬得样：最后加入少量无菌 PBS，充分吹打混匀底部沉淀，即可获得高质量单细胞悬液，准备进行后续实验。

10.质控计数：取少量细胞悬液进行 AOPI 染色，使用细胞计数仪检测细胞浓度与活率，直观评估样本质量。

三、细胞技术仪检测数据

通过净信单细胞制备系统制备的小鼠唾液腺单细胞悬液，经 AOPI 染色后在细胞计数仪下观察，可获得分散均匀、形态完整的单细胞群体，细胞活率高，碎片率低，充分满足单细胞测序上机要求。

四、注意事项

1、酶离者试剂盒溶解后，必须在−20°C低温保存；使用前用凉水缓慢解冻，切勿使用温热水，避免酶活性丧失。

2、全程保持冰上操作，取材后应尽快处理组织，减少细胞活性损失。

3、洗涤步骤不宜次数过多或时间过长，否则会造成细胞机械损失，影响最终产量和活率。

4、过滤时动作轻柔，避免对滤网施加过大压力，以保留更多完整细胞。

 

五、总结

唾液腺含有丰富的腺泡细胞、导管细胞及免疫细胞，是研究腺体发育与疾病的重要模型。净信单细胞制备系统凭借预置的唾液腺专属消化程序，结合经过优化的酶学配方，实现了从取材到单细胞悬液的全流程标准化操作，有效降低了批次间差异，让每一次实验都能稳定可靠。

如您正在开展唾液腺相关研究，欢迎联系我们获取定制化解决方案！