细胞培养时会遇到哪些问题？揭秘细胞培养中的常见障碍~

细胞培养是指在体外模拟体内的生理环境，让细胞在人工条件下生存、生长和繁殖的技术。尽管这项技术较为成熟，但在实际操作过程中仍有一定的挑战。那么细胞培养时会遇到哪些问题呢？

1、细菌污染：

常见的污染细菌有革兰氏阴性菌、大肠杆菌和假单胞菌等，革兰氏阴性菌中白色葡萄球菌等比较常见。

2、真菌污染

真菌污染是细胞培养过程中最常见的一种，尤其在梅雨季节进行细胞培养更易污染。细胞培养时需要提供 无菌环境：添加一定量的抗生素和两性霉素（青+链=双抗，青+链+两=三抗），防止微生物的污染。使用无菌培养皿、培养板等一次性耗材，减少污染的可能。

3、细胞生长缓慢，死细胞多

原因一：制备单细胞悬液时细胞活率和得率较低，到时初始活细胞较少。可以选择合适的单细胞悬液制备仪。 

量少时的样本，尤其是临床穿刺，可以用每管处理量小的仪器（最少可以达到5mg）；量大时可以用每管处理量大的仪器（每管可达4000mg），选择合适的仪器进行制备，确保制备的单细胞悬液得率和活率都在较高水平。

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单细胞悬液制备仪

原因二：培养基不合适，更换成熟的培养基，一些细胞的培养还会添加适量血清。

原因三：调整到最佳的培养条件，37±0.5℃（一些昆虫可能在25-28℃），7.2~7.4；二氧化炭培养箱等（开放式细胞培养中，需要5%的二氧化炭气体环境）。

4、支原体污染

支原体是一种大小介于细菌和病毒之间，最小直径0.2μm并独立生活的微生物。细胞培养时使用支原体清除试剂擦拭培养箱及超净工作台、培养试剂中加入支原体清除试剂，尽可能使用一次性耗材及成品培养基。

5、黑胶虫污染

黑胶虫是细胞培养中一种常见的污染物。首先可以尝试用抗生素处理，若抗生素处理效果不佳，黑胶虫可能来源于血清，可更换新批次的优质血清，重新培养细胞。

细胞培养后的应用领域：

培养后的细胞何去何从呢？可以做哪些研究呢？

①免疫学

单克隆抗体的自备、免疫细胞功能体外检测、淋巴细胞增殖测定、细胞因子的检测

②病毒学

细胞培养分离鉴定病毒、体外病毒药效试验、抗病毒抗体的检测、病毒致病机制的研究

③药理学

药效检测、药物毒性的检测、抗肿瘤药敏感性检测、血糖药物的研究

④肿瘤学

细胞转化、浸润实验、癌基因及抑癌基因检测、肿瘤多药耐药基因检测、肿瘤基因表达产物检测

⑤遗传学

染色体畸变分析、微核试验、基因突变、DNA断裂检测

⑥农业学

改造细胞遗传组成培育新品种、作物遗传种质的保存、提纯和复状

⑦生物工程

细胞转化、细胞融合、细胞脱核、基因转导、基因治疗、体细胞治疗等

小结虽然细胞培养过程中容易出现以上问题，但是随着科技的进步，制备单细胞方法的更新，培养材料的优化，推动着细胞培养向着更高效、更精准的方向发展，为医学、生物学等领域带来更多突破性成果。