免疫荧光检测一体化解决方案-无需盖玻

 　　在本应用中，我们介绍了一个简单的方案，用于在ibidi的μ-Slide 8孔腔室载玻片中培养和染色贴壁细胞。在这个例子中，我们培养大鼠成纤维细胞，用多聚甲醛固定它们，用MitoTracker染色线粒体，并用DAPI复染细胞核。也可以使用所有常用的固定技术。此外，通过一抗和二抗染色，可以通过免疫细胞化学探测其他细胞内结构。

　　 　　 　　
　　该实验包括四个主要步骤:
　　 　　
　　在本示例中，我们使用了以下材料:
　　• Rat fibroblasts (cell line)  大鼠成纤维细胞（细胞株）
　　• μ-Slide 8 well, ibiTreat (ibidi, 80826) 八孔腔室载玻片，ibiTreat底部
　　• Paraformaldehyde (2% in PBS)  多聚甲醛
　　• Triton® X-100 (Fluka, 0.1%)
　　• Blocking solution (1% BSA in PBS） 封片剂
　　• MitoTracker Green (Life Technologies, 50 nM)  线粒体绿色荧光探针
　　• DAPI (Sigma, 0.1 μg/ml)
　　• 荧光显微镜（倒置），带有适当的滤光片组
　　 　　 　　
　　免疫荧光实验方案对比: 传统染色方案VS ibidi染色方案
　　
　　使用任何一种ibidi免疫荧光染色方案比传统方案要简便、快捷的多，无需在盖玻片上培养细胞，细胞可直接在ibidi载玻片上培养和染色。
　　 　　
　　应用实例
　　 　　
　　原肠胚是小鼠胚胎干细胞的3D聚集体，就在轴延伸之前。它们在 µ-Slide 8 孔上成像，并染色Sox2（蓝色）、Brachyury（绿色）、Tbx6（红色）和 LaminB1（灰色），突出显示了这些转录因子在神经中胚层祖细胞 (NMP) 中的空间排列和分化顺序。将原肠胚国定在BABB中，并使用Leica LIGHTNING系统在配备40倍油镜的Leica Sp8共聚焦显微镜上成像。图片来自英国爱丁堡爱丁堡大学的Matthew French。
　　 　　
　　Jurkat T淋巴细胞（上）与抗原呈递细胞（下，蓝色）形成免疫突触的共聚焦图像。丝状肌动蛋白显示为绿色。多囊泡体显示为洋红色。细胞在 µ-Slide 8 孔上成像。图片来自西班牙马德里IIBM、CSIC的Manuel Izquierdo。
　　 　　
　　MDCK细胞的荧光显微镜法。线粒体(MitoTracker，红色)，肌动蛋白细胞骨架(Phalloidin，绿色)，细胞核(DAPI，蓝色)。