周密的实验设置方案，以及成像前对细胞的优化、可重复的处理，是显微镜实验成功的关键。为此，必须考虑几个因素，这些因素取决于显微镜方法和所使用的一般设置：
　　• 容器几何形状

　　• 基材、表面和涂层

　　• 无菌和可繁殖细胞处理

　　• 活细胞和健康细胞

　　• 满足显微镜的光学要求

　　• 可选：满足活细胞成像要求

　　

　　实验方案的关键问题是什么？

　　

　　如何为您的实验和显微镜技术选择最佳几何形状的实验器皿？

　　

　　存在多种细胞培养容器以满足不同细胞培养测定的复杂性，例如使用悬浮或粘附细胞的实验、2D或3D测定、单培养或共培养测定等等。主要培养容器的几何形状（如生长面积和体积）是影响实验结果和解释的重要因素，在开始之前应仔细考虑。此外，容器几何形状影响实验中的物理（例如蒸发）和光学（例如弯液面效应）特性。

　　

　　ibidi的解决方案

　　ibidi提供各种几何形状的成像小室，专门为您的实验量身定制。了解

　　

　　更多详情请点击查看“The Geometry of the ibidi Chambers”.

　　

　　您为您的特定细胞类型和显微镜方法选择了合适的基底、表面和涂层了吗？

　　

　　细胞的培养、生长、发育和信号传导强烈依赖于用于细胞培养的表面。此外，光学规格要求强烈决定了哪种基底是可取的。硼硅酸盐玻璃被广泛用作基底，然而，涂层可能是支持细胞粘附所必需的。聚合物的使用也非常普遍。它们通常经过组织培养处理，使得细胞能直接粘附；然而，并非市场上所有可用的聚合物都适用于显微镜。ibidi Polymer Coverslip聚合物塑料底部的实验器皿为各种高分辨率显微镜应用提供了最优的光学性能。

 

 

　　然而，如果细胞表面需要特定的细胞外基质（ECM），则可以使用涂层，例如胶原I、胶原IV或聚-L-赖氨酸。对于悬浮细胞或球体培养，则应使用非粘附表面，如ibidi Bioinert生物惰性表面。

　　

　　此外，还需要考虑是进行2D还是3D实验。有关更多详细信息，请点击查看3D Cell Culture Assays。

　　

　　ibidi的解决方案

　　

　　ibidi Labware耗材

　　

　　ibidi µ-Slides, µ-Dishes, and µ-Plates的突出特点是其超薄的盖玻片底部，非常适合高端显微镜应用。ibidi提供 ibidi Polymer Coverslip聚合物塑料底和ibidi Glass Coverslip玻璃底的实验器皿；也提供具有各种表面和涂层的成像小室，例如用于直接培养贴壁细胞的ibiTreat (tissue culture-treated) ibiTreat（组织培养处理的）表面。有关更多详细信息，请点击查看“Surfaces and Coatings”。

　　

　　Non-Adherent Bioinert Surface非贴壁生物惰性表面

　　

　　生物惰性是一种稳定、生物惰性的表面，用于在没有任何细胞或生物分子粘附的非粘附表面上对类器官、球体和悬浮细胞进行长期培养和高分辨率显微镜观察。目前有 µ-Dish 35^{mm, high}Bioinert。

 

 

　　Micropatterning微图案

　　

　　ibidi µ-Patterning technology实现了各种2D和3D细胞培养应用的空间定义的细胞粘附。小型化的粘合剂图案（例如，线、正方形或点）不可逆地印刷在ibidi Polymer Coverslip的非粘性生物惰性表面上，从而实现精确控制的细胞粘附。

 

 

　　有关ibidi µ-Patterning技术产品µ-Pattern Slides更多详情细信息，请点击查看“µ-Patterning technology”。

　　

　　您能确保细胞在培养过程中以及整个成像过程中都是健康的吗?

　　

　　显微镜可以做活细胞和固定细胞，这取决于实验设置和所需的读数。在活细胞中，显微镜检查过程会造成压力。细胞必须从培养箱中取出，这导致周围温度和湿度的降低。此外，细胞暴露在光下一段时间，这可能会导致光毒性。一般来说，所有的显微镜步骤都应该尽可能快地进行，同时保持精度，以最大限度地减少细胞压力。

　　

　　因此，任何成像实验都只能使用有活力和健康的细胞。为了确保这一点，应每天在显微镜下控制细胞附着、形态、融合、营养供应和污染迹象。此外，一些参数，如温度和湿度，必须保持一致。

 

人脐静脉内皮细胞(HUVEC)在µ-Slide 4孔中的免疫荧光

　　

　　您能确保您选择的显微镜技术的光学要求得到满足吗?

　　

　　每种显微镜技术对底材和细胞预处理都有自己的特殊要求，在计划实验时应考虑这些要求。有关不同衬底的光学参数的更详细信息更多详情细信息，请点击查看"Microscopy Parameters of Materials" and "Comparison of Material Specifications".

　　

　　此外，在开始显微镜检查之前，有一些一般的建议:

　　

　　·为了防止在容器内形成气泡，所有介质都应保持平衡。通通过最小化温差，可以避免可能严重干扰显微镜的外部对流。

　　

　　·在进行荧光显微镜检查时，最大限度地减少激发光引起的细胞应激尤为重要，因为这可能会改变实验的结果。

　　

　　·此外，细胞培养血管或培养基的自发荧光可能是不想要的副作用。因此，荧光显微镜应该应用具有低自发荧光的专门细胞培养容器。

　　

　　ibidi的解决方案

　　

　　许多显微镜技术，如相位对比、宽场荧光和共聚焦显微镜，都可以不受限制地使用任何具有ibidi Polymer Coverslip聚合物塑料底和ibidi Glass Coverslip玻璃底的ibidi实验器皿。

 

 

　　当计划一个活细胞成像实验时，您的设置是否满足所有必要的要求?

　　

　　如果连续或在特定时间点需要多个图像，那么活细胞成像可能是您的最佳选择。为了在活细胞成像实验中保持细胞的存活和健康，必须在显微镜上建立和维持生理条件——与培养箱内的设置相同。

 

　　ibidi的解决方案

　　

　　ibidi Stage Top Incubation Systems 孵育系统可用于载玻片/培养皿和多孔板。它允许在任何倒置显微镜上进行短期和长期分析期间准确可靠地控制重要的活细胞成像参数（温度、CO2和O2浓度以及相对湿度）。如果需要额外控制氧气水平（例如，在缺氧实验中），ibidi Stage Top Incubation Systems, CO2/O2 孵育系统是理想的解决方案。